實驗原理
將ChIP與第二代測序技術相結合的ChIP-Seq技術,能夠高效地在全基因組范圍內檢測與組蛋白、轉錄因子等互作的DNA區(qū)段。ChIP-Seq的原理是:首先通過染色質免疫共沉淀技術(ChIP)特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段,并對其進行純化與文庫構建;然后對富集得到的DNA片段進行高通量測序。研究人員通過將獲得的數百萬條序列標簽精確定位到基因組上,從而獲得全基因組范圍內與組蛋白、轉錄因子等互作的DNA區(qū)段信息。
實驗流程
(1)甲醛交聯(lián)整個細胞系(組織),將目標蛋白與染色質連結起來;
(2)分離基因組DNA,并用超聲波將其打斷成一定長度的小片段;
(3)添加與目標蛋白質特異的抗體,該抗體與目標蛋白形成免疫沉淀免疫結合復合體;
(4)去交聯(lián),純化DNA即得到染色質免疫沉淀的DNA樣本;
(5)將準備好的樣本進行深度測序。
結果展示